1.β-聚苹果酸及其盐和普鲁兰多糖的制备方法包括如下步骤: 1)接种发酵 将出芽短梗霉经活化和种子培养后接种于发酵培养基中,pH4.0~4.5,温 度20-28℃,通气量0.5-2.5vvm,培养72-96h,启动泵循环菌体、膜浓缩高 分量的β-聚苹果酸及普鲁兰多糖; 2)β-聚苹果酸及其盐和普鲁兰多糖的制备 (1)将第1)步获得的β-聚苹果酸浓缩液经弱碱性阴离子交换树脂吸 附,收集渗透液,用去离子水冲洗树脂,洗水与渗透液合并得溶液C,用碱 溶液洗脱吸附在树脂上的β-聚苹果酸,洗脱液经脱色得溶液D,将溶液D 浓缩,经有机溶剂沉淀、冷冻干燥或喷雾干燥步骤制得白色β-聚苹果酸盐产 品; (2)将(1)所得的溶液D或β-聚苹果酸盐产品溶液,经强酸性阳离子交 换树脂吸附,去除β-聚苹果酸盐中的盐离子,渗透液经膜浓缩去除多余的酸 根离子,经有机溶剂沉淀、冷冻干燥或喷雾干燥制得白色β-聚苹果酸产品; (3)将(1)所得溶液C用膜浓缩,浓缩液中加入氯仿/丁酮混合液(体 积比4:1),充分振荡使蛋白析出,离心或过滤除去沉淀。除蛋白的剩余溶 液加入2倍体积无水乙醇,充分搅拌,放置12-24h,使普鲁兰多糖沉淀,分 离所得沉淀经丙酮、乙醚依次洗涤,P2O5干燥,得普鲁兰多糖粉末状产品。
2.根据权利要求1所述的制备聚苹果酸盐、聚苹果酸及普鲁兰多糖的方 法,其特征在于:采用膜组件A回流菌体,渗透液1经膜组件B浓缩后,浓 缩液回流至储罐1,渗透液2返回发酵罐。
3.根据权利要求1所述的制备β-聚苹果酸盐、β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖的方法,其特征在于:采用膜组件B截留高分子量β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖,低分子量β-聚苹果酸、普鲁兰多糖及培养基成份回流至发酵过程,降低 末端产物反馈抑制作用并充分消耗培养基成份和让菌体将低分子量β-聚苹 果酸、普鲁兰多糖分别进一步聚合。
4.根据权利要求1所述的制备β-聚苹果酸盐、β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖的方法,其特征在于:采用的膜组件A为微滤膜,膜孔径0.22-0.8μm有 机或无机膜;采用的膜组件B为超滤膜,截留分子量为10-100kDa的有机或 无机膜。
5.根据权利要求4所述,其特征在于:采用的膜组件A和膜组件B的 型式为平板式或中空式。
6.根据权利要求4所述,其特征在于:采用的膜组件A和膜组件B中的膜 材料为:聚砜、聚醚砜、聚偏氟乙烯、聚四氟乙烯、聚丙烯腈等有机膜或氧 化铝质、氧化钴质、氧化硅质、硅酸铝质、碳化硅质等陶瓷膜或Ag膜、Ni膜、 Ti膜及不锈钢膜等金属膜或金属与陶瓷复合型无机膜。
7.根据权利要求1所述的制备β-聚苹果酸盐、β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖的方法,其特征在于:由膜组件B分离获得的浓缩液经阴离子交换树脂吸 附,用碱溶液洗脱吸附在树脂上的β-聚苹果酸,洗脱液经膜浓缩去除多余的 碱,浓缩液经脱色、进一步浓缩,有机溶剂沉淀、冷冻干燥或喷雾干燥制得 白色β-聚苹果酸盐产品;采用β-聚苹果酸盐产品溶液或权利要求1中的溶 液D,经强酸性阳离子交换树脂吸附,渗透液经膜浓缩去除多余的酸,进一 步浓缩,采用有机溶剂沉淀、冷冻干燥或喷雾干燥制得白色β-聚苹果酸产品。
8.根据权利要求1所述的制备β-聚苹果酸盐、β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖的方法,其特征在于:采用弱碱性的阴离子交换树脂吸附β-聚苹果酸而使 中性的普鲁兰多糖穿过,渗透液经浓缩、提纯、干燥制得普鲁兰多糖。
9.根据权利要求7所述的制备β-聚苹果酸盐、β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖的方法,其特征在于:所用的碱溶液为pH8-9的氨水或铵盐、0.1mol/L NaOH 等。
10.根据权利要求7所述的制备β-聚苹果酸盐、β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖的方法,其特征在于:所用的有机溶剂为乙醇、丙酮等。
11.根据权利要求7所述的制备β-聚苹果酸盐、β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖的方法,其特征在于:采用的膜为有机膜或无机膜,膜组件型式为平板式 或中空式;膜材料为聚砜、聚醚砜、聚偏氟乙烯、聚四氟乙烯、聚丙烯腈等 有机膜或氧化铝质、氧化钴质、氧化硅质、硅酸铝质、碳化硅质等陶瓷膜或 Ag膜、Ni膜、Ti膜及不锈钢膜等金属膜或金属与陶瓷复合型无机膜。
12.根据权利要求1所述的制备β-聚苹果酸盐、β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖的方法,其特征在于:所述的阴离子交换树脂为已处理的碳酸型、氢氧根 型和氯型的弱碱性的阴离子交换树脂。
13.根据权利要求1所述的制备β-聚苹果酸盐、β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖的方法,其特征在于:所述的阳离子交换树脂为强酸性阳离子交换树脂。
14.根据权利要求1所述的制备β-聚苹果酸盐、β-聚苹果酸及普鲁兰多 糖的方法,其特征在于:当葡萄糖浓度<10g/L时,流加300-800g/L葡萄糖、 15-40g/L NaNO3溶液,维持发酵液中葡萄糖浓度在10g/L左右。
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