一种厌氧微生物分离培养方法

本发明涉及一种厌氧微生物分离培养方法，该方法在整个操作过程中避免了目的微生物与氧气的接触，操作成本相对低廉，尤其适于生长温度高于50℃且对厌氧环境要求严格的难分离高温厌氧菌、严格厌氧菌。该方法只需在厌氧菌分离的部分操作时使用厌氧工作站，培养时可以使用普通培养箱，无需继续提供厌氧环境，避免了分离培养时一台厌氧工作站只能用于一种生长温度的细菌的情况；对于培养温度高于厌氧工作站温度上限的细菌，该方法同样适用。

1. 一种厌氧微生物的分离培养方法，其分离步骤为： 1)将含目的微生物的自然物质，利用含一定浓度指示剂的培养基富集，得 到细菌富集液； 2)将富集液、灭菌后未凝固的含一定浓度琼脂及一定浓度碳源的培养基、 灭菌后的可密封容器利用厌氧工作站的样品室，抽出空气，冲入氮气或 氢气氮气混合气体，将培养基中的氧气去除。 3)在厌氧条件下，在常温条件下，利用未凝固琼脂的培养基与细菌富集液 混合，密封于灭菌容器内； 4)此后无需提供厌氧环境，将容器置于普通烘箱或培养箱中，提供其适宜 温度，即可分离出目的微生物的菌落。
2. 根据权利要求1中1)，所述指示剂为七水合硫酸亚铁，其浓度范围为：
0.0001-0.02g/L。
3. 根据权利要求1中2)，所述的培养基及可密闭容器均经过高温高压灭菌，灭 菌温度为121℃，时间为15分钟；所述的未凝固琼脂培养基的琼脂浓度范围 为：0.03-1.8g/L；所述的培养基中，碳源为乙醇、乙酸钠、乳酸钠、葡萄糖、 淀粉或肉汤等有机化合物，浓度范围分别为：乙醇：0.2mL/L-10mL/L，乙酸 钠：0.3g/L-15g/L，乳酸钠：0.3g/L-15g/L，葡萄糖：0.3g/L-20g/L，淀粉：0.5g/L-20 g/L，肉汤：0.3mL/L-50mL/L。
4. 根据权利要求1中3)，所述的厌氧条件指：接种时需要提供厌氧手套箱或厌 氧操作台；所述的常温条件下是指操作温度为室温，即15-30℃。
5. 根据权利要求1中4)，所述的无需提供厌氧环境指样品可以置于普通培养箱 或烘箱中；适宜温度指培养温度为15-90℃。