一种提取植物DNA的方法及其专用试剂盒

本发明的目的是提供一种被称为mCTAB的植物DNA提取方法及其专用试剂盒。本发明所提供的试剂盒包括缓冲液A，所述缓冲液A由溶质及溶剂组成；所述溶质及其在所述缓冲液A中的终浓度如下：乙二胺四乙酸二钠4-6mmol·L

1.一种用于提取植物DNA的试剂盒，其特征在于：试剂盒包括缓冲液A； 所述缓冲液A由溶质及溶剂组成；所述溶质及其在所述缓冲液A中的终浓度如下：乙二胺四乙酸二钠5mmol·L^-1，NaCl0.25M，聚乙烯基吡咯烷酮2g/100ml；浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液10ml/100ml；所述溶剂为水； 所述试剂盒中还包括缓冲液B；所述缓冲液B由溶质及溶剂组成：所述溶质及其在所述缓冲液B中的终浓度如下：浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液10ml/100ml，乙二胺四乙酸二钠25mmol·L^-1，NaCl1.4M，CTAB3g/100ml，偏亚硫酸氢钠1g/100ml，抗坏血酸钠1g/100ml，聚乙烯基吡咯烷酮2g/100ml，β-巯基乙醇100ul/100ml；所述溶剂为水。 
2.一种提取植物DNA的方法，包括如下步骤： （1）将缓冲液A与植物组织粉末混匀，冰浴，离心，弃上清，收集沉淀； （2）将缓冲液B与步骤（1）所得沉淀混匀，放置，离心，收集上清液；所述放置的方法为60℃-70℃水浴90-120min； （3）用氯仿异戊醇溶液从步骤（2）中所得上清液中提取DNA，再进行去RNA及沉淀DNA的步骤，得到目的DNA； 所述缓冲液A和所述缓冲液B均为权利要求1所述试剂盒中的缓冲液A和缓冲液B。 
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，冰浴的时间为10min-20min。 
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述放置的方法为65℃水浴100min。 
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述步骤（1）之后，所述步骤（2）之前，还包括如下重复步骤：将上一步骤所得沉淀与所述缓冲液A混匀，冰浴，离心，弃上清，收集沉淀；直到上清不粘稠。 
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于： 所述步骤（1）中，所述缓冲液A与植物组织粉末的配比为1mL缓冲液A：20mg植物组织粉末；所述冰浴过程中颠倒混匀2-3次；所述离心为7000×g离心10min；所述冰浴的时间为15min； 所述步骤（2）中，所述缓冲液B与所述植物组织粉末的配比为0.7mL缓冲液B：20mg植物组织粉末；所述水浴过程中颠倒混匀数次；所述离心为10000×g离心10min； 所述步骤（3）中，所述用氯仿异戊醇溶液从步骤（2）中所得上清液中提取DNA的方法如下：向步骤（2）所得上清液中加入0.7mL氯仿异戊醇溶液，颠倒混匀10min， 10000×g，离心10min，收集上清；氯仿异戊醇溶液中氯仿:异戊醇的体积比为24:1；重复上述氯仿异戊醇提取DNA的步骤，直到离心后两个液面之间没有沉淀；然后加入0.5mL异丙醇，混匀，-20℃放置20min，10000×g，离心10min，弃上清； 所述步骤（3）中，所述去RNA的方法包括如下步骤：加入0.1mL的浓度为100mg·L^-1的RNase溶液，37℃放置30-60min；加入0.1mL去离子水、0.1mL5M NaCl溶液，0.8mL95%无水乙醇，混匀，10000×g离心10min，弃上清； 所述步骤（3）中，所述沉淀DNA的方法如下：加入0.5mL75﹪乙醇水溶液，弹起沉淀，10000×g，离心2min，弃上清。 
7.根据权利要求2-6中任一所述的方法，其特征在于：所述植物组织为植物叶片。