从马蔺子种皮中分离马蔺子甲素和马蔺子乙素的方法

本发明公开了一种从马蔺子种皮中分离马蔺子甲素和乙素的方法。该方法，包括如下步骤：1)将马蔺子种皮粉碎后与萃取剂混合进行亚临界流体萃取，得到萃取物；2)将步骤1)所得萃取物进行减压蒸发，收集萃取液；3)将步骤2)所得萃取液溶于石油醚后上样于硅胶柱进行洗脱，收集洗脱液，得到马蔺子素粗品；4)将马蔺子素粗品经高速逆流色谱分离，两相溶剂系统由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成，收集相应流分，浓缩，冷冻结晶，得马蔺子甲素和乙素。本发明使用亚临界流体萃取技术和高速逆流色谱分离技术，具有萃取效率高、分离时间短、溶剂消耗少、化合物纯度高、生产成本低等优点。

1.一种从马蔺子种皮中分离马蔺子甲素和马蔺子乙素的方法，包括如下步骤：1)将马蔺子种皮粉碎后与萃取剂混合进行亚临界流体萃取，得到萃取物；所述步骤1)萃取步骤中，萃取的次数为1-3次；每次萃取的时间均为30-90min；温度为15-35℃；压力为1.0-1.5MPa；萃取剂的流量为100-200L/h；2)将步骤1)所得萃取物进行减压蒸发，收集萃取液；3)将步骤2)所得萃取液溶于石油醚后上样于硅胶柱进行洗脱，收集洗脱液，得到马蔺子素粗品；4)用高速逆流色谱法对步骤3)所得马蔺子素粗品进行分离，依次得到流分I和II；其中，所述流分I中含有马蔺子甲素；所述流分II中含有马蔺子乙素；所述高速逆流色谱法中的固定相和流动相按照如下方法制备：将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水混匀后静置分层，分别收集上层溶剂和下层溶剂，分别进行超声，以上层溶剂为固定相，下层溶剂为流动相；所述正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为8-9：5-6：4-6：1-2；上样溶液为将步骤3)所得马蔺子素粗品溶于所述流动相而得。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)粉碎步骤中，粉碎后的目数为40-60目；所述萃取剂选自正丙烷、正丁烷、异丁烷、二甲醚和1，1，1，2-四氟乙烷中的至少一种；粉碎后的所述马蔺子种皮与萃取剂的用量比为1g：10-20mL；所述步骤1)萃取步骤中，萃取的次数为1-3次；每次萃取的时间均为30-90min；温度为15-35℃；压力为1.0-1.5MPa；萃取剂的流量为100-200L/h。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)粉碎步骤中，粉碎后的目数为40目；粉碎后的所述马蔺子种皮与萃取剂的用量比为1g：15mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)减压蒸发步骤中，分离压力为0.5～1.5MPa；分离温度为20～45℃。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤2)减压蒸发步骤中，分离压力为1.0MPa；分离温度为25-30℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤3)洗脱步骤中，洗脱剂为由石油醚和乙酸乙酯组成的混合液；所用硅胶柱中，硅胶的目数为200-300目；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为5：1-3；洗脱速度为20-30ml/min；洗脱温度为20-25℃；洗脱剂的用量为所用硅胶柱体积的2-4倍；所述硅胶柱的直径为6-8cm；高为100-120cm。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤3)洗脱步骤中，所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为5：1.5-2；洗脱速度为25ml/min；洗脱温度为25℃；洗脱剂的用量为所用硅胶柱体积的3倍；所述硅胶柱的直径为6cm；高为120cm。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤4)分离步骤包括：向高速逆流色谱仪的分离管中泵入所述固定相，保持分离管温度为25～35℃，以850～900rpm的转速正转30-50分钟后泵入所述流动相，待体系平衡后，泵入所述上样溶液。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤4)中，上样溶液的流速为1.5-3mL/min；所述马蔺子素粗品与流动相的用量比为100-300mg：10mL；所述分离步骤中，检测波长为270nm。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述步骤4)中，上样溶液的流速为2mL/min；所述马蔺子素粗品与流动相的用量比为150mg：10mL。
11.根据权利要求1-10任一所述的方法，其特征在于：所述步骤4)中，流分I和流分II的出峰时间依次为90-140min和160-200min。