一种快速制备土大黄苷和丹叶大黄素的方法

本发明公开了一种快速分离制备土大黄苷和丹叶大黄素的方法。该方法，包括如下步骤：1）将胡芦巴种子粉碎后于乙醇水溶液中回流提取，收集提取液，浓缩，得到胡芦巴提取物；2）将胡芦巴提取物用去离子水溶解后，用石油醚萃取，收集下层清液再用乙酸乙酯萃取，收集下层清液再用正丁醇萃取，收集上层萃取液浓缩得待分离样品；3）用高速逆流色谱法对待分离样品进行分离，依次得到含有土大黄苷、丹叶大黄素的流分；固定相和流动相由体积比为1～3：6～10：2～6：10～14的正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水而得；所述上样溶液为将待分离样品溶于所述流动相而得。本发明简单快速，制备量大，产品纯度高，适合于工业化大规模生产。

1.一种制备土大黄苷和丹叶大黄素的方法，包括如下步骤：1)将粉碎至40目的胡芦巴种子按料液比为1g：10mL加入质量百分浓度为40％的乙醇水溶液进行加热回流提取3次，合并提取液，60℃浓缩至干，得固形物质量百分含量为35％的胡芦巴提取物；2)将胡芦巴提取物用去离子水以1g：5mL溶解后，用等体积的石油醚萃取2次，合并下层清液再用等体积的乙酸乙酯萃取2次，合并下层清液再用等体积的正丁醇萃取2次，合并上层萃取液后浓缩，在50℃条件下减压浓缩，得固形物质量百分含量为15％的待分离样品；3)将含有正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的两相溶剂系统混匀后静置分层，分别收集上相溶剂和下相溶剂，分别超声20分钟，以上相为固定相，下相为流动相，向高速逆流色谱仪的分离管中泵入所述固定相，保持分离管温度为25℃，以800rpm的转速正转10分钟后泵入流动相，待体系平衡后，泵入上样溶液，并以1.5mL/min的流速进行高速逆流色谱分离，检测波长为320nm，依次接收流出液I和流出液II，将流出液I和II干燥至恒重，得到土大黄苷和丹叶大黄素；其中，正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为1:6:2:10；上样溶液为将步骤3)所得待分离样品溶于流动相而得；待分离样品与流动相的用量比为40mg：10mL；流出液I和流出液II的出峰时间依次为70-110分钟，140-180分钟；或者，包括如下步骤：1)将粉碎至60目的胡芦巴种子按料液比为1g：30mL加入质量百分浓度为80％的乙醇水溶液进行加热回流提取3次，合并提取液，60℃浓缩至干，得固形物的质量百分含量为62％的胡芦巴提取物；2)将胡芦巴提取物用去离子水以1g：15mL溶解后，用等体积的石油醚萃取10次，合并下层清液用等体积的乙酸乙酯萃取10次，合并下层清液再用等体积的正丁醇萃取10次，合并上层萃取液后，在70℃条件下减压浓缩，得固形物的质量百分含量为30％的待分离样品；3)将含有正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的两相溶剂系统混匀后静置分层，分别收集上相溶剂和下相溶剂，分别超声10分钟，以上相为固定相，下相为流动相，向高速逆流色谱仪的分离管中泵入所述固定相，保持分离管温度为35℃，以900rpm的转速正转20分钟后泵入所述流动相，待体系平衡后，泵入上样溶液，并以2.5mL/min的流速进行高速逆流色谱分离，检测波长为320nm，依次接收流出液I和流出液II，将流出液I和II干燥至恒重，得到土大黄苷和丹叶大黄素单体；其中，正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为3:10:6:14；上样溶液为将步骤3)所得待分离样品溶于流动相而得；待分离样品与流动相的用量比为160mg：10mL；流出液I和流出液II的出峰时间依次为50-80分钟，90-120分钟；或者，包括如下步骤：1)将粉碎至50目的胡芦巴种子按料液比为1:20g/mL加入质量百分浓度为60％的乙醇水溶液进行加热回流提取3次，合并提取液，60℃浓缩至干，得固形物的质量百分含量为57％的胡芦巴提取物；2)将胡芦巴提取物用去离子水以1g：10mL溶解后，用等体积的石油醚萃取5次，合并下层清液再用等体积的乙酸乙酯萃取5次，合并下层清液再用等体积的正丁醇萃取5次，合并上层萃取液后，在60℃条件下减压浓缩，得固形物的质量百分含量为27％的待分离样品；3)将含有正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的两相溶剂系统混匀后静置分层，分别收集上相溶剂和下相溶剂，分别超声30分钟，以上相为固定相，下相为流动相，向高速逆流色谱仪的分离管中泵入所述固定相，保持分离管温度为30℃，以850rpm的转速正转15分钟后泵入所述流动相，待体系平衡后，泵入上样溶液，并以2.2mL/min的流速进行高速逆流色谱分离，检测波长为320nm，依次接收流出液I和流出液II，将流出液I和II干燥至恒重，得到土大黄苷和丹叶大黄素；其中，正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为2:8:4:12；上样溶液为将步骤3)所得待分离样品溶于所述流动相而得；待分离样品与流动相的用量比为80mg：10mL；流出液I和流出液II的出峰时间依次为60-90分钟，110-150分钟；或者，包括如下步骤：1)将粉碎至50目的胡芦巴种子按料液比为1g：20mL加入质量百分浓度为80％的乙醇水溶液进行加热回流提取3次，合并提取液，60℃浓缩至干，得固形物的质量百分含量为55％胡芦巴提取物；2)将胡芦巴提取物用去离子水以1g：10mL溶解后，用等体积的石油醚萃取7次，合并下层清液再用等体积的乙酸乙酯萃取7次，合并下层清液再用等体积的正丁醇萃取7次，合并上层萃取液后，在60℃条件下减压浓缩，得固形物的质量百分含量为27.6％的待分离样品；3)将含有正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的两相溶剂系统混匀后静置分层，分别收集上相溶剂和下相溶剂，分别超声30分钟，以上相为固定相，下相为流动相，向高速逆流色谱仪的分离管中泵入所述固定相，保持分离管温度为30℃，以850rpm的转速正转15分钟后泵入所述流动相，待体系平衡后，分别在0分钟，145分钟，250分钟和340分钟相应的时间点依次泵入上样溶液，并以2.2mL/min的流速进行高速逆流色谱分离，检测波长为320nm，实现连续进样，循环分离，依次接收流出液I和流出液II，合并各流出液I，干燥至恒重；合并各流出液II干燥至恒重，得到土大黄苷和丹叶大黄素；其中，正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为2:8:4:12；上样溶液为将步骤(3)所得待分离样品溶于流动相而得；所述待分离样品与流动相的用量比为120mg：10mL；流出液I的出峰时间依次为60-90分钟，200-230分钟，320-350分钟，430-460分钟；流出液II的出峰时间依次为100-130分钟，240-270分钟，350-380分钟，465-490分钟。