一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法

本发明涉及一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法，该方法包括以下步骤：⑴原料预处理：将黑果枸杞果实去杂、水洗，得到处理后的黑果枸杞果实；⑵配制体积浓度为2%甲酸甲醇溶液；⑶将甲酸甲醇溶液加入到黑果枸杞果实中进行常温浸提，得到提取液；⑷提取液经过滤、蒸发浓缩，得到黑果枸杞花色苷浸膏；⑸大孔吸附树脂的处理；⑹将黑果枸杞花色苷浸膏复溶后上处理后的大孔吸附树脂，收集流出液；⑺流出液经减压浓缩后得到花色苷粗品；⑻将花色苷粗品注入高效半制备色谱柱中进行分离，即得纯度≥90%的花色苷单体；最后，所述花色苷单体经减压浓缩、真空冷冻干燥至恒重，即得花色苷单体成品。本发明分离效果好、耗时短、成本低。

1.一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法，包括以下步骤：⑴原料预处理：将黑果枸杞果实挑选去杂，用水冲洗，洗去表面浮土，得到处理后的黑果枸杞果实；⑵配制体积浓度为2%甲酸甲醇溶液：将200 mL甲酸与9800 mL甲醇混合均匀即得；⑶将所述步骤⑵所得的甲酸甲醇溶液加入到所述黑果枸杞果实中，在室温避光状态下按1 g：1 ~5mL的比例进行常温浸提，提取次数为1~3次，每次12~24 h，合并得到提取液；⑷所述提取液用滤纸除去不溶物、蛋白质、多糖后，得到滤液，该滤液于旋转蒸发仪上在40~50℃进行真空蒸发浓缩至膏状，得到黑果枸杞花色苷浸膏，并回收甲醇；⑸大孔吸附树脂的处理：将D-101大孔吸附树脂用体积浓度为95% 的甲醇浸泡 24 小时，然后用体积浓度为95% 的甲醇进行洗涤，再用去离子水清洗；将该大孔吸附树脂缓慢装入树脂柱中，再用去离子水冲洗至柱中颗粒干净，不再沉降为止，即得处理后的大孔吸附树脂；⑹将所述黑果枸杞花色苷浸膏用体积浓度为2 %的甲酸复溶后上所述处理后的大孔吸附树脂；上样后先以4~6倍柱体积的蒸馏水冲柱，然后再以3~6倍柱体积的甲醇冲柱，将花色苷类化合物解吸附，收集流出液；⑺所述流出液经减压浓缩后得到花色苷粗品，同时回收甲醇；⑻将所述花色苷粗品注入高效半制备色谱柱中，在柱温为25~40℃、流速为15~25 mL/min、进样量为200~600 mg、检测波长为525nm的条件下进行半制备色谱分离，根据出峰时间依次收集纯度较低的单体矮牵牛素-3,5-O-diglucosides, 矮牵牛-3-O-rutinoside (trans-p-coumaroyl)-5-O-glucosides；然后采用高效液相色谱系统在柱温为25~40℃、流速为0.6~1.0 mL/min、进样量为10 ul、检测波长为525nm的条件下进行检测，当样品纯度低于90%时，再次采用高效半制备色谱柱进行二次分离，即得纯度≥90%的花色苷单体；最后，所述花色苷单体于旋转蒸发仪上依次经减压浓缩、真空冷冻干燥至恒重，即得花色苷单体成品；所述高效液相色谱分离的条件是指流动相分别为A相：A：体积浓度为10%的甲酸溶液中含有体积浓度为0.1%的三氟乙酸，B相：含有体积浓度为15%的甲醇的乙腈溶液；梯度洗脱程序为：0~30 min，3 % ~ 11.5 % B相，线性梯度；30~40 min，11.5 %B相，等度洗脱；40~60 min，11.5 % ~ 15.5 % B相，线性梯度；60~70 min，15.5 % ~16 % B相，线性梯度；70~80 min，16 % ~ 23 % B相，线性梯度；80~100 min，23 %~ 3 % B相，线性梯度；所述半制备色谱分离的条件是指流动相分别为A相：含有体积浓度为50 %的乙腈的甲醇，B相：体积浓度为5 %甲酸的水溶液；一次纯化程序为：0~25 min，85 % ~ 65 %A相，线性梯度；25~35 min，65 % ~63 %A相，线性洗脱；35~50 min，63 %~55 %A相，线性洗脱；50~70 min，55 % ~85 %A相，线性洗脱；二次纯化程序为：流动相分别为A相：50 %甲醇水溶液，B相：5 %甲酸溶液，进行等度洗脱。
2.如权利要求1所述的一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法，其特征在于：所述步骤⑺和步骤⑻中减压浓缩的条件均是指40~50℃水浴，转速45~55 r.p.m，真空泵压力为0.06~0.08MPa。
3.如权利要求1所述的一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法，其特征在于：所述步骤⑻中真空冷冻干燥的条件是指冷肼温度为-45~-55 ℃，真空度为10~15 Pa。