一株适合不加糖面团发酵的面包酵母及其选育方法

本发明公开了一株适合不加糖面团发酵的面包酵母菌株及其选育方法，属于生物工程技术领域。本发明通过在亲本面包酵母菌株中，完全敲除葡萄糖磷酸变位酶基因PGM2，同时选用强启动子PGK1过表达H/ACA小核仁RNA(SNR84)全序列，来获得该快速发酵面包酵母菌株。所述快速发酵面包酵母菌株在不加糖面团发酵中1h CO产气量达到818mL，较亲本菌株提高了21.2％(亲本菌株不加糖面团发酵1h CO产气量675mL)，同时发酵时间缩短了18.0％。该面包酵母在不加糖面团中发酵能力强，有广泛的应用前景。

1.一株适合不加糖面团发酵的面包酵母，是在酵母出发菌株中完全敲除葡萄糖磷酸变
位酶基因PGM2的同时过表达H/ACA小核仁RNA的编码基因SNR84获得；
所述出发菌株为面包酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC31616。
2.如权利要求1所述的一株适合不加糖面团发酵的面包酵母，其特征在于，所述PGM2基
因其Gene ID为：855131，核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQ NO:1所示；所述SNR84基因其
Gene ID为：9164879，核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQ NO:2所示。
3.一株适合不加糖面团发酵的面包酵母的选育方法，包括以下步骤：
(1)PGM2基因的敲除
①以质粒pUC6为模板，PCR扩增KanMX基因，上游引物如核苷酸序列表SEQ ID NO:7所
示，下游引物如核苷酸序列表SEQ ID NO:8所示；
②将步骤(1)-①得到的PCR产物导入酵母出发菌株中，获得KanMX替代敲除PGM2的重组
菌株1；
③用带有Cre重组酶的pGAPza质粒去除步骤(1)-②获得菌株中的KanMX，获得完全敲除
PGM2的重组菌株2；
(2)SNR84基因的过表达
①以面包酵母CICC31616总DNA为模板，PCR扩增SNR84基因；
②将步骤(2)-①得到的PCR产物连接到含有PGK1强启动子的质粒上，获得表达质粒1；
③以表达质粒1为模板，通过PCR扩增获得SNR84基因和强启动子的连接片段；
④将步骤(2)-③获得的片段连接到带有KanMX抗性的载体上，得到表达质粒2；
⑤将步骤(2)-④获得的表达质粒2导入步骤(1)-③的重组菌株2中，获得完全敲除PGM2
同时过表达SNR84的重组菌株；
所述出发菌株为面包酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC31616。
4.如权利要求3所述的一株适合不加糖面团发酵的面包酵母的选育方法，其特征在于，
所述含有PGK1强启动子的质粒为pUC质粒。
5.如权利要求3所述的一株适合不加糖面团发酵的面包酵母的选育方法，其特征在于，
所述带有KanMX抗性的载体为Yep352载体。
6.如权利要求3所述的一株适合不加糖面团发酵的面包酵母的选育方法，其特征在于，
所述PCR产物和表达质粒2导入的方法为醋酸锂转化法。
7.如权利要求1所述的适合不加糖面团发酵的面包酵母在发酵面包生产中的应用。