一种分光光度法快速检测大肠菌群的方法及应用

本发明涉一种分光光度法快速检测大肠菌群的方法，利用大肠菌群在37℃可以发酵乳糖产酸、产气特性，以自制培养基为主，其中添加指示剂溴甲酚紫和TTC溶液，大肠菌群发酵培养后不仅能生产红色沉淀，而且可使培养液发生了由紫色变为黄色的颜色变化，利用该发酵液颜色的变化程度与溶液中所含大肠菌群数量成正相关的特性，可得出待检样品液中大肠菌群的含量。本发明方法相比于现行国标方法，在检测时间上有了大幅缩减，在加样后培养60min?400min即可检测样品中的大肠菌群数值，试用范围较广，满足了众多检测领域要求检测时间短的需求，在未来快速检测领域会有较好的应用前景。

1.一种分光光度法快速检测大肠菌群的方法，其特征在于：步骤如下：
⑴溶液配制：
乳糖发酵检测培养液：50-90μL2％(质量浓度)溴甲酚紫溶液、4g胰蛋白胨、0.5g乳糖、
0.5gD-甘露醇、0.75gNaCl、0.02g十二醇硫酸钠、0.01g脱氧胆酸钠、100mL蒸馏水，pH6.8-
7.2，115℃，15min灭菌后待用；
TTC溶液：TTC加入无菌水制成0.5-3％(质量浓度)溶液，避光保存、待用；
⑵检测过程：
①样品匀液的制备：
无菌操作取待检样品，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成体积比为1:10的
样品匀液，或质量：体积(g：L)为1:10的样品匀液；
②过滤：
用中速定量滤纸过滤样品匀液，得滤液；按滤液：浓缩的待检液的体积比为5-10：1的比
例用膜过滤器过滤滤液，得浓缩的待检液；取浓缩的待检液按体积比为1：5-10的比例加入
含有乳糖发酵检测培养液中，同时，按浓缩的待检液：TTC溶液的体积比mL：μL为1：30-80的
比例取TTC溶液到乳糖发酵检测培养液中，置于37℃培养；
③标准曲线的绘制：
培养60-400min后，检测培养基中有颜色变化并伴有红色沉底物质生产，取检测管中的
培养液，经离心处理发酵液，5000-7000r/min离心，离心2min-5min，取上清液置于石英比色
皿中用分光光度计进行检测，测量360nm—500nm特殊纳米处的吸光值，建立不同含量大肠
菌群混合培养液颜色和大肠菌群含量之间的对应线性关系，绘制标准曲线；
④待检样品的检测：
检测样品时，按步骤①-③的方法进行处理和培养待检样品，培养液有变色和沉淀现
象，按前述步骤将培养液离心后，取上清液在360nm—500nm处测定吸光值，记录数据，与③
中标准曲线进行比对，根据对比结果确定未知样品中所含大肠菌群数，最终得出待检样品
中所含大肠菌群数值。
2.根据权利要求1所述的分光光度法快速检测大肠菌群的方法，其特征在于：所述步骤
⑵③中标准曲线的回归方程为：
lgY＝14.89X-1.33
R²＝0.991
公式中：Y：未知样品中大肠菌群的预计含量
X:360nm—500nm处的OD值
R：相关系数。
3.如权利要求1或2所述的分光光度法快速检测大肠菌群的方法在水质监测、生物、食
品、卫生方面的大肠菌群的快速检测方面中的应用。