一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其在防治烟草白粉病中的应用

本发明从药用植物马比木中分离筛选得到具有拮抗作用的菌株，经微生物分类学鉴定，该菌株命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D1菌株，并采用该菌株的发酵液获得一种能够对烟草白粉病进行防治的微生物菌剂。本发明最显著的特征是：提供了一种新的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株D1，其发酵液制备的微生物菌剂对烟草白粉病具有良好的防治作用，是植物种植产业上重要的微生物资源。

1.一种解淀粉芽孢杆菌菌株，其特征在于，命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)D1菌株，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2015年9月21日，保藏编号为CCTCCNO:M2015528。
2.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)D1菌株，其特征在于，所述菌株是从药用植物马比木(Nothapodytespittosporoides)中分离获得。
3.根据权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)D1菌株，其特征在于，D1菌株的分离培养方法步骤如下：(1)马比木植物组织的准备：取新鲜马比木的根，在自来水下冲洗干净；(2)表面消毒及无菌检测：在超净工作台上，用1-5‰的吐温-80无菌水将材料洗2～3次，再用无菌水洗至无泡沫，用无菌滤纸吸去表面水分；用75％的酒精浸泡2～4min，无菌水冲洗2～3次；0.1-0.5％升汞表面消毒1～3min，后用无菌水冲洗3～4次，收集最后一次冲洗水进行微生物检测，无菌方可，无菌滤纸吸干多余水分；将材料切或剪成直径4～6mm大小的组织切段；(3)内生细菌的分离纯化：将步骤(2)消毒后的组织切段接种于PDA培养基平板上，于22-30℃恒温培养1～3天，选择对内生真菌有拮抗作用的细菌菌落，挑取其划线纯化2～3次，然后以接种针挑取纯化后的单菌落划线接种于PDA固体斜面培养基上，22-30℃下培养2～4d，观察没有污染后，贴好标签放于0～5℃的冰箱中保存，即得D1菌株。
4.根据3所述的D1菌株的分离培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)马比木植物组织的准备：取新鲜马比木的根，在自来水下冲洗干净；(2)表面消毒及无菌检测：在超净工作台上，用1‰的吐温-80无菌水将材料洗2～3次，再用无菌水洗至无泡沫，用无菌滤纸吸去表面水分；用75％的酒精浸泡2～4min，无菌水冲洗2～3次；0.1％升汞表面消毒1～3min，后用无菌水冲洗3～4次，收集最后一次冲洗水进行微生物检测，无菌方可，无菌滤纸吸干多余水分；将材料切或剪成直径4～6mm大小的组织切段；(3)内生细菌的分离纯化：将步骤(2)消毒后的组织切段接种于PDA培养基平板上，于28℃恒温培养1～3天，选择对内生真菌有拮抗作用的细菌菌落，挑取其划线纯化2～3次，然后以接种针挑取纯化后的单菌落划线接种于PDA固体斜面培养基上，28℃下培养2～4d，观察没有污染后，贴好标签放于4℃的冰箱中保存，即得D1菌株。
5.根据权利要求1～3任一项所述的解淀粉芽孢杆菌菌株D1在防治烟草白粉病中的应用。
6.一种微生物菌剂，其特征在于，所述菌剂由解淀粉芽孢杆菌菌株D1和PD培养基制成，所述菌剂的制备方法如下：步骤1：将活化的解淀粉芽孢杆菌D1菌株接种于200mL的PD培养基中，20-32℃、100-200r/min摇床培养18-30h，得到一级种子液；步骤2：将步骤1得到一级种子液，接种于10L的PD培养基中，26-36℃、100～150r/min发酵培养24-60h，得到二级种子液；步骤3：将步骤2得到二级种子液，接种于80L的PD培养基中，26-36℃、100-200r/min发酵培养24-60h，即得微生物菌剂。
7.根据权利要求6所述的微生物菌剂，经下列步骤得到：步骤1：将活化的解淀粉芽孢杆菌D1菌株接种于200mL的PD培养基中，28℃、120r/min摇床培养24h，得到一级种子液；步骤2：将步骤1得到一级种子液，接种于10L的PD培养基中，32℃、120r/min发酵培养48h，得到二级种子液；步骤3：将步骤2得到二级种子液，接种于80L的PD培养基中，32℃、150r/min发酵培养48h，即得微生物菌剂。
8.如权利要求6或7所述的微生物菌剂在防治烟草白粉病中的应用。