一种基于氯化血红素催化反应的四环素比色检测方法

本发明公开了一种基于氯化血红素催化反应的四环素比色检测方法，包括将功能性ssDNA序列与含有四环素的样品混匀孵育，制备出待检测样液的步骤；还包括将待检测样液与氯化血红素混匀孵育，之后加入磷酸二氢钠缓冲溶液混匀，然后加入H

1.一种基于氯化血红素催化反应的四环素比色检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：将功能性ssDNA序列与含有四环素的样品混匀孵育，制备出待检测样液；步骤2：将待检测样液与氯化血红素混匀孵育，之后加入磷酸二氢钠缓冲溶液混匀，然后加入H₂O₂和3,3',5,5'-四甲基联苯胺，通过测定混合溶液在450nm处吸光值变化来判断四环素的含量；所述功能性ssDNA序列组成为：5’-ATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3’。
2.根据权利要求1所述的基于氯化血红素催化反应的四环素比色检测方法，其特征在于：步骤1和步骤2分别包括以下步骤：步骤1.1：制备已知浓度的四环素检测体系：取若干只离心管，分别加入功能性ssDNA序列溶液和不同浓度的四环素标准液，使得整个检测体系中的四环素含量维持在10-200nM，充分混匀后置于25-35℃条件下孵育50-70min，之后加入氯化血红素溶液继续孵育25-40min，最后再加入磷酸二氢钠缓冲溶液，充分混匀后作为标准溶液备用；步骤1.2：制备空白对照体系溶液；步骤2.1：分别向步骤1.1和步骤1.2制备的标准溶液和空白对照体系溶液中加入H₂O₂与3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液进行混匀，然后分别取标准溶液和空白对照体系溶液用酶标仪进行波长扫描，扫描范围为300-800nm，获得其吸收光谱，测定450nm波长处吸光值，获得其吸收光谱；步骤2.2：以不同浓度的四环素测定的空白样品的吸光值-待测样品的吸光值作图，绘制标准曲线；步骤2.3：制备样品检测体系：取实际样液，按步骤1.1方法制备得到实际样液的检测溶液后按步骤2.1方法测定其450nm处吸光值；步骤2.4：根据步骤2.3实际样液测得的吸光值，查标准曲线，可以求得不同样品中四环素的含量。