一种不育系快速转育方法

本发明公开了一种不育系快速转育方法，即通过体细胞杂交和分子标记选择相结合的方法快速转育不育系。属于作物育种技术领域。首先，分离供体（不育）胞质和受体（可育）原生质体；然后，用碘乙酰胺（IOA）处理受体原生质体使其细胞质失活，再按2:1(v/v)的比例混合供体胞质和受体原生质体，采用电融合法或化学融合法使供、受体融合；最后，在适合的培养条件下使融合体再生，选择与受体基因型、表现型一致的不育再生植株，用受体花粉授粉后正常结实的即为受体不育系。

1.一种不育系快速转育方法，其特征在于：材料选择、酶解和离心，得到原生质体和胞质分离；然后通过对供、受体的有效钝化、融合，获得胞质融合体；融合体的培养和再生，最后，通过形态学和分子标记选择获得不育系再生植株。
2.根据权利要求1所述的一种不育系快速转育方法，其特征在于：包含以下步骤：（1）供受体的原生质体的分离1)材料：培养50-80天的烟草无菌苗；2)酶解：1%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.6mol/L甘露醇+0.1%MES的酶液组合，在25-28℃下酶解，离心；3）胞质体：0.6mol/L甘露醇+15%、30%、45%蔗糖梯度，离心获得胞质体；（2）非对称融合技术1）钝化：0.1mMIOA处理受体后离心；2）化学融合：在25～30℃下,40%的PEG融合20～25min；3）电融合：以U’～1.5V；t1:40s；U_∏50V；t2:50s；n2和U”～1.5V；t3:40s的参数融合；（3）融合体的培养和再生1）融合体的培养：以DPD培养基外加2,4-D1.0mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L培养，50%以上融合体开始分裂后加入新鲜培养基KM8P，此后每周加入渗透压减半的新鲜培养基KM8P；2）愈伤的增值和分化：增值培养基：1/2MS+IBA+KT，分化培养基：MS+IAA+KT；（4）不育系的鉴定筛选1）基因型：SSR、ISSR分子标记鉴定；2）表现型：与受体表现性状一致，但不育，能接受受体和其他烟草材料的花粉而结实；3）倍性：气孔保卫细胞叶绿体计数法。
3.根据权利要求1所述的一种不育系快速转育方法，其特征在于：增值培养基：1/2MS+2.5mg/LIBA+1.5mg/LKT，分化培养基：MS+0.25mg/LIAA+2.0mg/LKT。