一种诱导杜鹃兰原球茎芽簇增值的方法

本发明公开了一种诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，该方法包括以下步骤：1)以杜鹃兰人工授粉的种子进行无菌萌发获得的原球茎为外植体；2)将原球茎置于1/2MS基本培养基中进行增殖培养；3)将增殖后的原球茎置于1/4MS基本培养基中诱导芽簇；4)将上述芽簇未分化与分化部分进行分割后置于不同培养基中进行芽簇增殖和分化出苗培养；5)将出苗植株置于1/4MS基本培养基中进行生根培养。取杜鹃兰组培苗进行炼苗并移栽到适宜其生长的基质中，直至长成健壮的杜鹃兰植株。本发明方法有效地提高了杜鹃兰种苗的繁殖系数，为实现其规模化生产奠定了基础。

1.一种诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：以种子萌发的原球茎为外植体，经组织培养诱导芽簇增殖与分化出苗，并通过生根培养、炼苗移栽后获得健壮的杜鹃兰植株；具体步骤如下：步骤1：采用人工授粉获得的杜鹃兰种子接种于培养基中进行培养，萌发获得的原球茎作为组织培养的外植体；步骤2：将步骤1中的外植体接种于原球茎增殖培养基上进行原球茎增殖培养直至原球茎颜色由白色转为黄绿色，形成簇状原球茎且表面有白色毛状物；步骤3：挑选步骤2中生长健壮的原球茎接种于芽簇诱导培养基上进行芽簇诱导培养诱导原球茎形成芽簇；步骤4：将步骤3中的芽簇分割成两部分，一部分是芽簇中未分化的原球茎，将其接入步骤3中芽簇诱导培养基中继续诱导芽簇形成；另一部分是基部明显膨大且具有分化成苗趋势的原球茎，将其接入生根培养基上进行生根培养直至长出3～5条长为2～3cm根的健壮杜鹃兰幼苗；步骤5：将步骤4中成功诱导生根的健壮杜鹃兰幼苗转至炼苗室，3～5d后，打开封口膜取出幼苗，洗净幼苗根上附着的培养基，并吸干水分，然后用800倍多菌灵溶液浸泡其根5min，移栽到苗床上，喷水保湿，2个月后移栽上盆，获得生长健壮的杜鹃兰植株。
2.根据权利要求1所述的诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：步骤1中的培养基为KC+NAA 0.7mg·L^-1+6-BA 1.5mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+活性炭0.5g·L^-1+土豆汁75g·L^-1。
3.根据权利要求1所述的诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：步骤2中的原球茎增殖培养基为1/2MS+6-BA 1.0mg·L^-1+IBA 1.0mg·L^-1+活性炭0.5g·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂5.5g·L^-1。
4.根据权利要求1所述的诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：步骤3中的芽簇诱导培养基为：以不含蔗糖的1/4MS、1/2MS或MS为基本培养基，分别添加TDZ 1.5～
2.5mg·L^-1+NAA0.1～0.3mg·L^-1+蔗糖10～30g·L^-1。
5.根据权利要求1所述的诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：步骤4中的生根培养基为1/4MS+6-BA 2.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1+活性炭0.5g·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂5.5g·L^-1。
6.根据权利要求4所述的诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：步骤3的芽簇诱导培养基为：1/4MS+TDZ 1.5mg·L^-1+NAA 0.3mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂5.5g·L^-1。
7.根据权利要求1-6中任意一项所述的诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：所有培养基pH均调节为5.8。
8.根据权利要求3所述的诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：步骤2的培养条件是：在温度15℃、光照时间12h·d^-1、光照强度2000 lx的光照培养箱内进行原球茎增殖培养。
9.根据权利要求4或5所述的诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：步骤3或步骤4的培养条件是：在温度(25±2)℃、光照时间12h·d^-1、光照强度2000 lx的光照培养箱内进行芽簇诱导培养或生根培养。