1.一种利用荧光探针在极端pH值下的活性细胞荧光成像方法,其特征是以喹哪啶衍生物(E)-2-(2,4-二羟基苯基)乙烯基-8-羟基喹啉,简称探针,作为极端pH值下的活性细胞荧光成像探针,其结构式为:
方法是:(1)用探针乙腈溶液和缓冲溶液配制pH在2~4范围的探针溶液,再将探针与活性细胞孵化后,用荧光显微镜检测,呈现清晰的绿色荧光细胞图像,随pH值的增大,细胞的绿色荧光减弱;(2)用探针乙腈溶液和缓冲溶液配制pH在10~12范围的探针溶液,再将探针溶液与活性细胞孵化后,用荧光显微镜检测,呈现清晰的红色荧光细胞图像,随pH值的增大,细胞的红色荧光增强;(3)用探针乙腈溶液和缓冲溶液配制pH在5~9范围的探针溶液,再将探针与活性细胞孵化后,荧光显微镜检测不到细胞的荧光图像;上述所指极端pH值是指pH2~4、pH10~12。
2.根据权利要求1所述的一种利用荧光探针在极端pH值下的活性细胞荧光成像方法,其特征是用乙腈和缓冲溶液配制探针溶液的方法为:(1)用乙腈溶解探针试剂,配成探针浓度100μM的乙腈溶液;用浓度为50mM的三羟甲基氨基甲烷Tris和50mM的HCl溶液,用pH计调节,配成pH=2~9的不同pH值的缓冲溶液;取浓度为100μM的探针乙腈溶液100μL,加Tris-HCl缓冲溶液900μL,配制成pH=2~9的不同pH值的探针溶液;(2)用乙腈溶解探针试剂,配成探针浓度100μM的乙腈溶液;用浓度为50mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES和50mM的NaOH溶液,用pH计调节,配成pH=10~12的不同pH值的缓冲溶液;取浓度为100μM的探针乙腈溶液100μL,加HEPES-NaOH缓冲溶液900μL,配制成pH=10~12的不同pH值的探针溶液。
3.根据权利要求1所述的一种利用荧光探针在极端pH值下的活性细胞荧光成像方法,其特征是探针与活性细胞孵化的方法,是用人体前列腺癌细胞PC3,经复苏接种于含10%胎牛血清以及含1%双抗的培养基中,培养基为改良型RPMI-1640,在温度为37℃,5%CO
2以及饱和湿度为100%的培养箱中培养,每隔2-3天传代1次,选择生长状态良好的细胞接种于12孔板中培养,密度为2×10
4个/ml,次日用新鲜培养基清洗细胞两次,将细胞分别浸入含不同pH值的探针培养液中,在培养箱中孵育,使不同pH值的缓冲溶液配制的探针对细胞染色,吸出含探针的培养液,用新鲜培养基清洗细胞,然后用荧光显微镜检测。
4.根据权利要求1所述的一种利用荧光探针在极端pH值下的活性细胞荧光成像方法,其特征是探针与细胞的孵化过程中,控制探针的浓度在10~100μM范围,探针能很好渗透到活体PC3细胞内,细胞呈圆润饱满状,探针与细胞具有良好的相容性,探针与细胞的孵化时间在20~30min内未见细胞凋亡,探针对细胞无毒性;荧光显微镜检测时,在pH为2~4的范围,用荧光显微镜的绿色通道,激发波长为450~490nm检测,呈现清晰的绿色荧光细胞图像;在pH为10~12的范围,用荧光显微镜的红色通道,激发波长为510~550nm检测,呈现清晰的红色荧光细胞图像;在pH为5~9的范围,用荧光显微镜的红色或绿色通道检测,不显现细胞图像。
5.根据权利要求1~3所述的一种利用荧光探针在极端pH值下的活性细胞荧光成像方法,其特征是所用的试剂为分析纯或生化试剂,所用水为二次蒸馏水或生理盐水;所用活性PC3细胞为人体前列腺癌细胞;所用的拍照设备为荧光倒置显微镜。
6.根据权利要求1~3所述的一种利用荧光探针在极端pH值下的活性细胞荧光成像方法,其特征是利用所述探针的荧光成像方法对活性细胞内pH检测:活性PC3细胞经复苏、传代、接种、培养、清洗后,将细胞分别浸入pH为3.6或pH为10.6的50mM缓冲溶液中,在37℃,5%CO
2以及饱和湿度为100%的培养箱中孵育5~10min,吸出含不同pH值的缓冲溶液,用新鲜培养基清洗细胞3次;用荧光显微镜检测;再将上述细胞浸入含10mM探针的培养液中孵化1h,吸出含探针的培养液,用新鲜培养基清洗细胞3次,用荧光显微镜检测;经pH为3.6的缓冲溶液孵化的细胞,观察不到细胞的荧光图像,该细胞再经探针孵化后,清晰地观察到绿色荧光细胞图像;经pH为10.6的缓冲溶液孵化的细胞,观察不到细胞的荧光图像,该细胞再经探针孵化后,清晰地观察到红色荧光细胞图像。