一种检测山羊DQA1基因外显子4的单核苷酸多态性的引物方法

本发明公开了一种检测山羊免疫相关基因DQA1基因的单核苷酸多态性的引物及方法，引物由上游引物和下游引物组成，检测时以山羊基因组DNA为模板，利用上、下游引物进行PCR反应扩增目的片段，用变性剂处理PCR产物，对变性后的扩增片段进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，应用银染法染胶，根据聚丙烯酰胺凝胶电泳结果即可判定山羊DQA1基因外显子4的等位基因。通过本发明设计的核苷酸引物以及建立的检测体系，可较为准确、快捷的扩增群体中不同等位基因型，可以准确的分析得到山羊DQA1基因外显子4的不同单核苷酸突变位点。

1.一种检测山羊免疫相关基因DQA1基因的单核苷酸多态性的方法，检测引物由上游引物和下游引物组成，其特征在于：所述上游引物和下游引物的DNA序列为：上游引物：5’-AGTCTGTAGAACCAACCCCTCT-3’下游引物：5’-TGGGAACATAGTACAGACGAGG-3’；检测方法包括以下步骤：以山羊基因组DNA为模板，利用所述的上、下游引物进行PCR反应扩增目的片段，用变性剂处理PCR产物，对变性后的扩增片段进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，应用银染法染胶，根据聚丙烯酰胺凝胶电泳结果即可判定山羊DQA1基因外显子4的等位基因；PCR反应条件为：在15μL总体系中，2×Es Taq MasterMix为7.5μL，上下游引物各为
0.75μL，DQA模板为2μL ，余量为ddH2O，PCR反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s、
58.5℃退火30s、72℃延伸1min，30个循环；72℃终延伸5min，4℃保存；所述的变性剂由98%去离子甲酰胺，0.025%溴酚蓝，0.025%二甲苯青，100μL 5mol/L EDTA组成；电泳检测步骤为：采用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶在250V电压下预电泳30min；点样后，常温下，250V电泳10min，110v电泳16h。
2.如权利要求1所述的一种检测山羊免疫相关基因DQA1基因的单核苷酸多态性的方法，其特征在于：非变性聚丙烯酰胺凝胶由 26.6 mL29%的丙烯酰胺-1%N,N-双丙烯酰胺、20 mL的5×TBE、720μL10%的过硫酸铵、52.8 mL的ddH2O、44μL的TEMED组成。