1.一种检测溶液或细胞中10
-7~10
-5M低浓度H
2O
2的方法,其特征是以化合物(E)-2-(2,4-二羟基苯基)乙烯基-8-羟基喹啉为检测H
2O
2的荧光或比色探针试剂,简称探针,其结构如下:
检测方法为:在乙腈/H
2Ov/v,3/2,pH11介质中(1)荧光光谱法检测H
2O
2,以415nm为激发波长,测定探针在580nm处的荧光强度降低随H
2O
2浓度变化,用校正曲线法检测;(2)紫外吸收光谱法检测H
2O
2,测定探针在410nm处的吸光度降低随H
2O
2浓度变化,用校正曲线法检测;(3)利用探针的颜色变化目视检测H
2O
2:日光下探针溶液颜色随H
2O
2的加入由橙红色变为无色;在365nm紫外灯下探针溶液发射荧光颜色随H
2O
2的加入由橙红色变为无色;(4)在活细胞内利用H
2O
2使探针的荧光猝灭,用荧光成像可视检测细胞内H
2O
2。
2.根据权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10
-7~10
-5M低浓度H
2O
2的方法,其特征是在浓度为10μM探针的乙腈/H
2Ov/v,3/2,pH=11溶液中,用荧光或紫外-可见吸收法检测H
2O
2,检测时反应时间控制在20~30min。
3.根据权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10
-7~10
-5M低浓度H
2O
2的方法,一种检测溶液和细胞中浓度低于10
-5MH
2O
2的方法,其特征是探针荧光和紫外-可见吸收法检测H
2O
2时,其它共存氧化剂或还原剂:NO
3-,NO
2-,t-BuOOH(过氧化氢叔丁醇),ClO
-,GSH(谷胱甘肽),O
2-,t-BuO×(叔丁氧基自由基),×OH(羟基自由基)在浓度与H
2O
2相同时,不干扰探针对H
2O
2的测定。
4.按照权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10
-7~10
-5M低浓度H
2O
2的方法,其特征是探针用荧光法检测H
2O
2的浓度线性范围为8.3×10
-7~4.3×10
-5M,检测限为2.3×10
-8M;紫外-可见吸收法检测H
2O
2的浓度线性范围为8.5×10
-7~5.2×10
-5M,检测限为8.9×10
-7M。
5.按照权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10
-7~10
-5M低浓度H
2O
2的方法,其特征是所述探针的荧光成像检测活性细胞内H
2O
2方法为:活性PC3细胞经复苏、传代、接种、培养、清洗后,将细胞浸入pH值为11的含10mM探针的培养液,在37℃,5%CO
2以及饱和湿度为100%的培养箱中孵育1h,吸出含探针的培养液,用新鲜培养基清洗细胞,用荧光显微镜检测,呈现清晰的红色荧光细胞图像;再将上述细胞浸入含20mMH
2O
2的培养液中孵化10min后,吸出含H
2O
2的培养液,用新鲜培养基清洗细胞3次,用荧光显微镜检测,观察到微弱的红色荧光细胞图像;再经H
2O
2孵化30min后,用荧光显微镜检测,观察不到细胞的荧光图像。
6.根据权利要求1-5之一所述的一种检测溶液或细胞中10
-7~10
-5M低浓度H
2O
2的方法,其特征是所用的试剂为分析纯或生化试剂,所用水为二次蒸馏水或生理盐水;所用活性PC3细胞为人体前列腺癌细胞;所用的拍照设备为荧光倒置显微镜。