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一种检测溶液或细胞中10~10M低浓度H2O2的方法

一种检测溶液或细胞中10~10M低浓度H2O2的方法

  • 专利类型:发明专利
  • 有效期:不限
  • 发布日期:2021-04-01
  • 技术成熟度:详情咨询
交易价格: ¥面议
  • 法律状态核实
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  • 代办官方过户
  • 交易成功

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  • 技术(专利)类型 发明专利
  • 申请号/专利号 201610001038.X 
  • 技术(专利)名称 一种检测溶液或细胞中10~10M低浓度H2O2的方法 
  • 项目单位 贵州大学
  • 发明人  
  • 行业类别 人类生活必需品
  • 技术成熟度 详情咨询
  • 交易价格 ¥面议
  • 联系人 吴佳琨
  • 发布时间 2021-04-01  
  • 01

    项目简介

    本发明一种检测溶液或细胞中10
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  • 02

    说明书


    1.一种检测溶液或细胞中10-7~10-5M低浓度H2O2的方法,其特征是以化合物(E)-2-(2,4-二羟基苯基)乙烯基-8-羟基喹啉为检测H2O2的荧光或比色探针试剂,简称探针,其结构如下:检测方法为:在乙腈/H2Ov/v,3/2,pH11介质中(1)荧光光谱法检测H2O2,以415nm为激发波长,测定探针在580nm处的荧光强度降低随H2O2浓度变化,用校正曲线法检测;(2)紫外吸收光谱法检测H2O2,测定探针在410nm处的吸光度降低随H2O2浓度变化,用校正曲线法检测;(3)利用探针的颜色变化目视检测H2O2:日光下探针溶液颜色随H2O2的加入由橙红色变为无色;在365nm紫外灯下探针溶液发射荧光颜色随H2O2的加入由橙红色变为无色;(4)在活细胞内利用H2O2使探针的荧光猝灭,用荧光成像可视检测细胞内H2O2
    2.根据权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10-7~10-5M低浓度H2O2的方法,其特征是在浓度为10μM探针的乙腈/H2Ov/v,3/2,pH=11溶液中,用荧光或紫外-可见吸收法检测H2O2,检测时反应时间控制在20~30min。
    3.根据权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10-7~10-5M低浓度H2O2的方法,一种检测溶液和细胞中浓度低于10-5MH2O2的方法,其特征是探针荧光和紫外-可见吸收法检测H2O2时,其它共存氧化剂或还原剂:NO3-,NO2-,t-BuOOH(过氧化氢叔丁醇),ClO-,GSH(谷胱甘肽),O2-,t-BuO×(叔丁氧基自由基),×OH(羟基自由基)在浓度与H2O2相同时,不干扰探针对H2O2的测定。
    4.按照权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10-7~10-5M低浓度H2O2的方法,其特征是探针用荧光法检测H2O2的浓度线性范围为8.3×10-7~4.3×10-5M,检测限为2.3×10-8M;紫外-可见吸收法检测H2O2的浓度线性范围为8.5×10-7~5.2×10-5M,检测限为8.9×10-7M。
    5.按照权利要求1所述的一种检测溶液或细胞中10-7~10-5M低浓度H2O2的方法,其特征是所述探针的荧光成像检测活性细胞内H2O2方法为:活性PC3细胞经复苏、传代、接种、培养、清洗后,将细胞浸入pH值为11的含10mM探针的培养液,在37℃,5%CO2以及饱和湿度为100%的培养箱中孵育1h,吸出含探针的培养液,用新鲜培养基清洗细胞,用荧光显微镜检测,呈现清晰的红色荧光细胞图像;再将上述细胞浸入含20mMH2O2的培养液中孵化10min后,吸出含H2O2的培养液,用新鲜培养基清洗细胞3次,用荧光显微镜检测,观察到微弱的红色荧光细胞图像;再经H2O2孵化30min后,用荧光显微镜检测,观察不到细胞的荧光图像。
    6.根据权利要求1-5之一所述的一种检测溶液或细胞中10-7~10-5M低浓度H2O2的方法,其特征是所用的试剂为分析纯或生化试剂,所用水为二次蒸馏水或生理盐水;所用活性PC3细胞为人体前列腺癌细胞;所用的拍照设备为荧光倒置显微镜。
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