一种由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法

本发明涉及一种由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法，属于植物生物技术领域。本发明以贵州地方品种顶坛花椒的未成熟果实为外植体，通过不同浓度的细胞分裂素和生长素组合诱导产生珠心胚和胚状体，并对珠心胚再生培养过程进行了研究，建立了顶坛花椒离体再生体系，为花椒种质资源的有效利用、脱毒保存、生物技术改良等提供理论依据和技术支持。

1.一种由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法，包括如下步骤：(1)取顶坛花椒绿色果实内的珠心组织进行离体培养；(2)MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 0.4mg/L+3％蔗糖+0.4％Gelzan为诱导培养基，诱导珠心组织产生珠心胚；(3)珠心胚继代培养，得到胚状体，继代培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 0.4mg/L+3％蔗糖+0.4％Gelzan；(4)将胚状体于WPM+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA的分化培养基进行培养，形成丛生芽；(5)将小芽切下转接到生根培养基1/2WPM+0.2mg/L IBA上培养并从主根上萌发侧根，叶片青绿色；(6)生根后的顶坛花椒进行炼苗移栽；所述绿色果实为成熟前7－10天的果实。
2.根据权利要求1所述的由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法，所述珠心组织取出前需要对绿色果实进行消毒，所述消毒步骤包括：在无菌条件下用75％医用酒精浸泡杀菌10min，无菌水冲洗一遍，用0.1％升汞灭菌30min，最后用无菌水冲洗4～5次，吸水纸吸干表面水分。
3.根据权利要求1所述的由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法，所述步骤(2)(3)(4)(5)的培养条件为温度25±1℃、光照强度1500～2000lx、光周期16h/8h。
4.根据权利要求3所述的由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法，所述步骤(2)培养时间12－15天，所述步骤(3)的培养时长为25－35天。
5.根据权利要求3所述的由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法，所述步骤(5)的培养时长为40－50天。
6.根据权利要求5所述的由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法，所述步骤(6)的生根苗为主根长达5cm，且侧根有4～5条。
7.根据权利要求6所述的由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法，所述步骤(6)中的生根苗移栽前在自然光下适应3－5天，取出冼净基部培养基再移栽。
8.根据权利要求7所述的由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法，所述步骤(6)中移栽基质为珍珠岩：菜园土＝1：3。
9.根据权利要求8所述的由珠心胚诱导顶坛花椒快速繁殖的方法，所述步骤(6)中移栽后的生根苗加盖保鲜膜。